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氨基酸分析仪检测胶原蛋白海绵

2024-12-02

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本品为未知含量及种类的胶原蛋白海绵制成品，样品为棉絮状。使用Biochrom30+全自动氨基酸分析仪，对其所含的氨基酸组分及含量进行分析。结果表明该未知样中氨基酸各单个氨基酸含量的浓度见附页结果表。样品中均包含羟脯氨酸，此次测试使用氧化水解程序进行测试，已验证羟脯氨酸可使用氧化水解进行测定。


一、样品前处理

1、所用试剂

1.1 Loading Buffer：钠盐系统，pH 2.2

1.2 浓盐酸，浓度≥36%,优级纯

1.3 6mol/L 盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀

1.4 水：去离子水

1.5 18种氨基酸标准品


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2、前处理设备

1）分析天平:精度为 0.0001g

2）移液枪及枪头

3）一次性注射器及0.22um滤膜

4）真空干燥烘箱

5）无油真空泵

6）电热平板及称量瓶


3、样品制备（参考GB/T 1453-2016）

取干燥恒重后的样品置于水解管中，精密称定，加入水解管中，加入10mL 6mol/L盐酸(1.3)，冷冻3min⁓5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空,然后充入氮气,重复3次后，在充氮气状态下拧紧螺盖。将水解管放入真空干燥箱中，110°C水解22-24h，冷却、混匀、开管，在电热平板上60℃浓缩至干，必要时加入少许水(1.4)，重复蒸干1-2次，加入适量PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解(1.1)，振荡混匀后,吸取溶液通过0.22 μm 滤膜后，转移至进样瓶，为样品测定液,供仪器测定用。


二、氨基酸分析仪分析方法参数（Biochrom 30+）：

1）色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6x20cm

2）分离程序：


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运行时间：经分析时间+再生时间 87.40 min

3）反应单元温度：135°C

4）检测波长：570nm、440nm同时检测


三、样品中氨基酸含量的计算

样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算:

Ci = Cs/As × Ai× F ······························· (1)式中:

Ci ——样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Cs ——氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Ai ——试样测定液氨基酸i的峰面积;

As ——氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

F ——样品稀释倍数。


附、氨基酸制成品中的酸水解氨基酸其分析图谱及做样结果：

图1.  样品01


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图2.  样品02


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图3.  样品03


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